B群弱凝集腦膜炎診斷血清

廣州健侖生物科技有限公司

【儲(chǔ)藏條件】

2~8℃避光保存，在標(biāo)明的有效期內(nèi)使用。

【有效期】

24個(gè)月

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名：腦膜炎奈瑟菌診斷血清英文名：antisera for N.meningitidis

【產(chǎn)品說(shuō)明】

本套血清用于A、B、C、W、X、Y等6個(gè)常見(jiàn)血清QUN（serogroup）腦膜炎奈瑟菌的血清群鑒定，將相應(yīng)血清群腦膜炎奈瑟菌制備滅活抗原，免疫家兔所得，血清產(chǎn)品經(jīng)免疫吸附去除了非特異性凝集成分，具有效價(jià)高，特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。

B群弱凝集腦膜炎診斷血清

【規(guī)格】

每種血清群1瓶，每瓶2ml，均為使用液。

【使用方法】

1.產(chǎn)品在使用前，由冰箱拿出，恢復(fù)溫度到室溫后使用。

2.樣品分離培養(yǎng)物，經(jīng)鏡檢和生化鑒定，確定為腦膜炎奈瑟菌后，再進(jìn)行血清分群檢測(cè)，如果未能確定為腦膜炎奈瑟菌，不宜直接進(jìn)行血清凝集檢測(cè)，以免產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。

3.待鑒定細(xì)菌在血平板或巧克力平板上，5% CO₂，培養(yǎng)48小時(shí)。

4.用酒精擦拭玻璃片。

5.用蠟筆或防水筆將玻璃片分為8個(gè)方格。

6. 在玻片每個(gè)方格的下半部分，用移液器加5%的福爾馬林溶液（基于生物安全目的）。

7. 用無(wú)菌或一次性10μl接種環(huán)挑取BAP平板上過(guò)夜培養(yǎng)的細(xì)菌菌落。

8. 在玻片上將細(xì)菌與5%的福爾馬林溶液混勻，混勻后的液體應(yīng)該不透明，在加抗血清前應(yīng)保持細(xì)菌懸液不干燥。

9. 在玻片的上方加10μl血清群特異的抗血清，同時(shí)在陰性對(duì)照側(cè)加BS或者生理鹽水。

10. 緩慢的混合細(xì)菌懸液和抗血清，使上部的抗血清和下部的細(xì)菌懸液充分混合1-2分鐘。不要做旋轉(zhuǎn)晃動(dòng)，以免不同血清群的血清會(huì)相互混合污染。

11.在燈光下，黑暗背景條件下觀察結(jié)果。1-2分鐘內(nèi)呈2+及以上凝集現(xiàn)象為陽(yáng)性，1-2分鐘內(nèi)呈現(xiàn)2+以下凝集現(xiàn)象為陰性。如果過(guò)了2分鐘，才發(fā)生的凝集反應(yīng)按陰性處理。

【凝集反應(yīng)的強(qiáng)度等級(jí)】

當(dāng)抗血清與細(xì)菌接觸，會(huì)引起凝集反應(yīng)，使細(xì)胞（細(xì)菌）凝集或呈簇，細(xì)胞（細(xì)菌）上清液變得清亮，細(xì)胞懸液濃度或使用的抗血清濃度不同，會(huì)產(chǎn)生不同的強(qiáng)度的凝集反應(yīng)，見(jiàn)圖示

4+ 所有的細(xì)胞都發(fā)生凝集，細(xì)胞懸液清亮。

3+ 75%的細(xì)胞發(fā)生凝集，細(xì)胞上清略微渾濁不清。

2+ 50%的細(xì)胞發(fā)生凝集，細(xì)胞上清略微渾濁不清。

1+ 25%的細(xì)胞發(fā)生凝集，細(xì)胞上清略微渾濁不清。

+/- 少于25%的細(xì)胞發(fā)生凝集，可見(jiàn)有顆粒狀的成分。

0 沒(méi)有肉眼可見(jiàn)的凝集，上清懸液渾濁、平滑。

【血清群確定】

1. 1-2分鐘內(nèi)，出現(xiàn)3+或4+凝集為陽(yáng)性反應(yīng)（強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)）。對(duì)于B群腦膜炎奈瑟菌來(lái)說(shuō)，如果出現(xiàn)2+及以上的凝集則可認(rèn)為陽(yáng)性。

2. 陰性反應(yīng)是+/-、1+ 或 2+（弱凝集）的凝集程度。

3. 當(dāng)菌株僅與一種抗血清出現(xiàn)凝集，但和生理鹽水不凝集時(shí)才能鑒定為該種血清型。

4. 如果不能確定血清群，菌株記為不能分群腦膜炎奈瑟菌（NG）。

5. 關(guān)于不能分群腦膜炎奈瑟菌（NG）菌株。

6. 在生理鹽水中凝集，無(wú)論與任何抗血清發(fā)生強(qiáng)反應(yīng)，都應(yīng)標(biāo)記為自凝菌。

7. 在生理鹽水中不自凝，和多種血清出現(xiàn)凝集，記為NG。

8. 不和生理鹽水凝集，也不和任何一個(gè)血清凝集也記作NG。

【結(jié)果難以判斷時(shí)解決方案】

腦膜炎奈瑟菌具有可變性（有莢膜與無(wú)莢膜，小菌落與大菌落，慢生長(zhǎng)與快生長(zhǎng)，強(qiáng)凝集與弱凝集），有時(shí)候很難清除解釋結(jié)果，一些建議如下：

1. 挑取同一平板上的另一個(gè)細(xì)菌克隆進(jìn)行重復(fù)凝集試驗(yàn)。

2. 如果玻片上的結(jié)果不明確，將試管中配置懸液，重復(fù)該試驗(yàn)。

3. 加20µl抗血清直接涂于玻片上，直接加一環(huán)細(xì)菌進(jìn)行混均凝集。

4. 再次培養(yǎng)，第二天進(jìn)行重新試驗(yàn)。

5. 如果當(dāng)天的平板上有各種大小不一的菌落，每種菌落再次分離純培養(yǎng)，第二天每種菌落進(jìn)行試驗(yàn)。大菌落一般會(huì)有比較好的凝集反應(yīng)，小菌落次之。

6. 如果試驗(yàn)中的問(wèn)題還是不能解決，應(yīng)當(dāng)和對(duì)照菌株同時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)，確保試劑的正確性。

【血清質(zhì)量控制】

在對(duì)未知的菌落進(jìn)行血清分群之前，應(yīng)選用一套腦膜炎奈瑟菌參考菌株（A, B, C, W, X, Y）和一株可分群的腦膜炎奈瑟菌進(jìn)行質(zhì)量控制檢測(cè)。操作步驟：

1. 新購(gòu)進(jìn)的每一批次抗血清要用參考菌株進(jìn)行檢測(cè)。

2. 半年后重復(fù)質(zhì)量控制檢測(cè)

3. 如果血清管暴露于超過(guò)4℃環(huán)境，或者懷疑血清被污染時(shí)，也要對(duì)血清進(jìn)行重新的質(zhì)量控制。

4. 關(guān)于血清分群和質(zhì)量控制，每一批次的抗血清需要使用所有的參考菌株進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，記錄質(zhì)量控制驗(yàn)證結(jié)果。

【血清質(zhì)量控制檢測(cè)結(jié)果判讀】

1. 通過(guò)質(zhì)量控制檢測(cè)

與同源性的抗原反應(yīng)，1-2分鐘內(nèi)，出現(xiàn)3+或 4+程度的凝集；單一血清群的抗血清不與其他血清群的腦膜炎奈瑟菌反應(yīng)，不與NG菌株凝集反應(yīng)，鹽水不自凝。

2. 分群血清質(zhì)量控制檢測(cè)失敗

如果抗血清與一種或多種參考菌株凝集反應(yīng)，或/和NG參考菌株反應(yīng)，鹽水自凝，則血清不能使用。

【其他所需材料】

潔凈玻片、生理鹽水（0.85%的氯化鈉溶液）、5%的福爾馬林溶液、接種環(huán)或移液器。

【注意事項(xiàng)】

1. 本產(chǎn)品只能作為腦膜炎奈瑟菌血清型判定的輔助方法，zui終的判定需形態(tài)學(xué)、生化方法和血清學(xué)方法共同進(jìn)行。

 2. 本產(chǎn)品應(yīng)避免冷凍。反復(fù)凍融會(huì)使血清產(chǎn)生沉淀。

3. 本產(chǎn)品在保存過(guò)程中可能會(huì)產(chǎn)生渾濁或沉淀，這并不表示該產(chǎn)品已被污染。離心或者過(guò)膜去掉渾濁或沉淀后，可以正常使用。

4. 本產(chǎn)品含有0.1%*作為防腐劑，丟棄時(shí)需倒入下水管，并用大量的水沖洗下水管。

廣州健侖生物公司提供SSI血清產(chǎn)品，包括沙門(mén)氏菌，志賀氏菌，大腸桿菌，肺炎鏈球菌，嗜血桿菌等。并且提供德國(guó)有名血清品牌SiFin的核心血清產(chǎn)品，德國(guó)SiFin血清質(zhì)量好，實(shí)驗(yàn)*，已被各高校實(shí)驗(yàn)室，研究所列為推薦血清產(chǎn)品！詳情可咨詢(xún)工作人員！

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革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)顯著不同，導(dǎo)致這兩

類(lèi)細(xì)菌在染細(xì)菌性、抗原性、毒性、對(duì)某些藥物的敏感性等方面

的很大差異。
革蘭氏染細(xì)菌的結(jié)果取決于細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)即革蘭氏染細(xì)菌原

理為：G﹢菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性障，當(dāng)乙

醇脫細(xì)菌時(shí)，肽聚糖脫水而孔障縮小，故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在

細(xì)胞膜上。呈紫細(xì)菌。
Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫細(xì)菌不能使其結(jié)構(gòu)收縮，

其脂含量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)

胞壁，沙黃復(fù)染后呈紅細(xì)菌。革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁厚約20-80nm，

有15-50層肽聚糖片層，含20-40%的磷壁酸。革蘭氏陰性菌細(xì)胞

壁厚約10nm，僅2-3層肽聚糖，另外還有脂多糖、細(xì)菌外膜和脂蛋

白。
細(xì)菌菌（Actinomycete）是另一大類(lèi)革蘭氏陽(yáng)性菌，根據(jù)DNA中

鳥(niǎo)嘌呤(G)和胞嘧啶(C)的含量，細(xì)菌菌被稱(chēng)為高G+C革蘭氏陽(yáng)性

菌，而厚壁菌被稱(chēng)為低G+C革蘭氏陽(yáng)性菌。如果細(xì)胞的第二層膜是

衍生特征，這兩類(lèi)革蘭氏陽(yáng)性菌可能是細(xì)菌基部的分支，否則它

們可能組成關(guān)系相對(duì)較近的單系群。它們被認(rèn)為可能是古細(xì)菌和

真核生物的祖先，因?yàn)樗鼈兌既狈Φ诙幽ぃ⑶揖哂幸恍┥?/p>

上的相似性，比如含有固醇類(lèi)。此外，盡管恐球菌-棲熱菌

(Deinococcus-Thermus)類(lèi)細(xì)菌結(jié)構(gòu)上類(lèi)似革蘭氏陰性菌，但也

可被染成革蘭氏陽(yáng)性。
雖然是革蘭氏陰性的有機(jī)體，可是它巨大的感染力是來(lái)自于它獨(dú)

特的細(xì)胞外膜小葉上包含有脂多糖抗原。
血清不僅用于血液凝集的研究，還可用于直接觀察熒光標(biāo)記過(guò)的

組織抗體?；颊唧w內(nèi)的特殊抗體可以被熒光抗體間接檢測(cè)。這項(xiàng)

測(cè)試也已成功應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附法與微量凝集試驗(yàn)。
嗜肺軍團(tuán)菌是一種細(xì)胞兼性寄生的細(xì)菌，可入侵變形蟲(chóng)，或是人

類(lèi)的巨噬細(xì)胞內(nèi)。

The cell wall structures of Gram-positive and Gram-negative bacteria are significantly different, leading to both

Bacteria in bacteria, antigenicity, toxicity, sensitivity to certain drugs and so on

The big difference.
The result of Gram-stain bacteria depends on the structure of the bacterial cell wall, Gram-stain bacterial origin

Reason: G + bacteria: cell wall thickness, peptidoglycan reticular molecules form a permeability barrier,

Alcohol off bacteria, peptidoglycan dehydration and pore narrowing, it retains the crystal violet - iodine complexes in the

Cell membrane. Was purple bacteria.
G ˉ bacteria: peptidoglycan thin layer, loosely crosslinked, ethanol bacteria can not shrink its structure,

The fat content is high, ethanol will dissolve the fat, the gap increases, Crystal Violet - iodine complex dissolution thin

Cell wall, sand yellow dye red bacteria. Gram-positive bacteria cell wall thickness of about 20-80nm,

There are 15-50 layers of peptidoglycan tablets containing 20-40% of teichoic acid. Gram-negative bacteria cells

Wall thickness of about 10nm, only 2-3 layers of peptidoglycan, in addition to lipopolysaccharide, bacterial outer membrane and lipid egg

White.
Actinomycete is another broad category of Gram-positive bacteria, according to DNA

The content of guanine (G) and cytosine (C), bacteria is called high G + C Gram positive

Fungi, while Fibrobacteria are called low G + C Gram-positive bacteria. If the cell's second membrane is

Derived characteristics, these two types of Gram-positive bacteria may be the base of the bacterium branch, otherwise it

They may form relatively monophyletic groups. They are thought to be archaebacteria and

Eukaryotic ancestors, because they both lack a second membrane and have some biochemistry

On the similarity, such as containing sterols. In addition, despite the Phoxiococcus - Thermus bacteria

(Deinococcus-Thermus) bacteria similar to the structure of Gram-negative bacteria, but also

Can be stained Gram-positive.
Although Gram-negative organisms, but its great appeal comes from it alone

Extracellular membrane leaflets contain lipopolysaccharide antigen.
Serum not only for blood coagulation research, can also be used for direct observation of fluorescently labeled

Tissue antibodies. Specific antibodies in the patient's body can be indirectly detected by fluorescent antibodies. this

The test has also been successfully applied to ELISA and microagglutination test.
Legionella pneumophila is a cell-facultative parasitic bacteria that can invade amoeba, or human

Class of macrophages.